在PCR反应中防止污染


聚合酶链式反应(PCR),DNA扩增,是在分子生物学中使用的规定的工艺。PCR技术在医学和传染病的诊断,法医和研究应用取得了很大进展。有关治疗方案和临床疗效的决策往往是根据患者的细胞DNA和RNA分析。确保适当的污染控制保证医生获得**好的结果。

DNA照片
DNA聚合酶和PCR分析是高度容易受到污染。鉴于PCR是与在同一平板上的多个患者样品许多临床诊断应用中使用,污染可以通过数千个,数百万的DNA序列拷贝的承载。如果污染物在反应初期推出,则误差以指数的方式,导致虚假或不准确的结果放大。

PCR污染的**常见的原因:

  • 不正确的实验室的建立和工作流程不当
  • 运营商污染
  • 样品分离失败
  • 实验室设备消毒不当

实验室装置的优化工作流PCR

创建一个适当的实验室环境,建立一个单向流两种方式来防止PCR污染。为了确保适当的设施控制,质量保证人员将建立具体到他们的实验室空间和现有设备的尺寸文档标准化协议。人员应认真培训,并提供获得书面程序。

PCR工作站2

这种单向工作流程涉及以下5个**佳做法:

  1. 建立独立的工作区域或房间的每个PCR反应步骤
  2. 以前从未处理管返回上一工作区域或房间
  3. 主混合应准备并在反应容器中等分并移动到相邻的和隔离区
  4. 其中主混合物制备的DNA模板**从不存在于区域
  5. 从已完成的扩增反应管**不能储存未扩增样品,或未使用的试剂

而大型实验室对每个PCR反应在工厂内建立独立的房间的豪华,小型实验室使用的PCR罩或类似的死气箱(罩无风机),以创造必要的污染防治的分离。

避免PCR工作站的操作员污染

污染的任何实验室贡献**大的是运营商。为了减轻这种,运营商遵守建立的单向工作流程和维持适当的实验室齿轮是重要的。按照这些提示,以消除运营商的污染:

  • 人员**戴手套,并定期更换
  • 运营商**保持清洁的工作面上练习尽职调查
  • 运营商**遵守既定的工作流程单向协议

PCR抽油烟机,消毒和操作员安全
紫外灯

的PCR罩可以配备抗微生物UV灯,其在设定的时间间隔操作以消毒的工作环境。UV-C照射可能是有害的,因此工人应该是走出了房间,而紫外线灯是从事。如果这是不可能的,但是,实验室的工作人员**始终这些灯在工作时佩戴合适的防护装备。重要的是,配备有UV灯罩被构造适当抗紫外线材料。

  • PCR反应应在一个单独的PCR反应罩内进行
  • 整个发动机罩的工作表面,以及移液管,应以1:10或1:20稀释的漂白剂,接着用70%的乙醇漂洗灭菌
  • 每个PCR反应遮光罩应包含不应该被去除和/或转移到另一个罩设备(移液管,离心机,塑料实验室器具)的专用片

推荐移液器在PCR抽油烟机

选择容积式移液器障碍提示,以防止从一个样品到下结转。这些移液器是理想的,因为与可支配微量注射器提示的挥发性液体和高粘度样品的工作。容积式移液器不仅能提供更高的**度,相比于空气置换移液器他们也提供出色的保护样本。

结论

污染的PCR反应可以通过以下基本实验室的**佳实践并结合具体的敏感PCR应用一些专门的技术来控制。理想情况下,用于研究遗传物质的实验室设备不应被用于其它实验; 即使有合适的清洗协议,仍然存在交叉污染的机会。通过下面的详细,记录协议提高工作效率和准确性。