细胞破碎的实验室方法浅谈

酶解法破碎酵母细胞 

【试验意图】   操练细胞破碎的各种办法,比较各种办法的好坏。   【试验原理】  跟着重组DNA 技能得到广泛应用以来,生物技能发生了质的飞跃。许多基固工程商品都是胞内物质,**将细胞破壁。使商品得以释放。才干进一步获取,因而细胞破碎是获取胞内商品的**过程。破碎办法的妥当与否,直接影响到所获取商品的产值、质量和生产成本。咱们就介绍一下酶解法的试验操作。 

酶解法:运用不一样水解酶,如溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶和酯酶等,于37℃,pH8, 处理15分钟,能够专注性地将细胞壁分化,释放出细胞内含物,此法适用于多种微生物。例如从某些细菌细胞获取质粒DNA时,可选用溶菌酶(来自蛋清)破细胞 壁,而在破酵母细胞时,常选用蜗牛酶(来自蜗牛),将酵母细胞悬于0.1mmol/L 柠檬酸一磷酸氢二钠缓冲液(pH=5.4)中,加1%蜗牛酶,在30℃处理30分钟,即可使 大多数细胞壁决裂,如一起参加0.2%疏基乙醇作用会非常好。此法能够与研磨法联合运用。 
【试验材料】  (一) 器件:离心机,水浴锅,一般光学显微镜,载玻片,盖玻片,酒精灯,接种环,双层瓶,擦镜纸,量筒,烧杯,移液管。 (二) 试剂  (1) 柠檬酸一磷酸氢二钠缓冲液(pH=5.4)。  (2) 蜗牛酶。  (3) 疏基乙醇。   【试验过程】   
1. 细胞培育和搜集  将活化酵母菌株接入马铃薯培育基中,于30℃摇床培育。在对数生长期离心搜集细胞,制成湿菌体。 2. 细胞的破碎 
1)取5ml菌液悬液于10ml的1号试管中,再取1%的蜗牛酶于2号试管中。再取0.2%的疏基乙醇于3号试管中。 
2)将三支都放入30℃的水浴中,预热30s后,将装有蜗牛酶的2号试管和装有疏基乙醇的3号试管均倒入盛有菌液的试管中,在水浴中处理30分钟。 3.  取一滴菌液镜检。取5个视界数出破碎细胞的个数并算出平均值。比照各种办法的破碎细胞数量。